ΑΣΚΗΣΗ ΜΕ ΚΑΤΑΣΚΕΥΗ ΑΝΑΣΥΝΔΙΑΣΜΕΝΟΥ DNA

Το παρακάτω τμήμα DNA  περιέχει ένα γονίδιο που είναι υπεύθυνο για τη σύνθεση ενός  ολιγοπεπτίδιου .

3΄ CGAGCTCGGATCGTCTTAAGCTTGTACGTCAGCTAA  5΄

5΄ GCTCGAGCCTAGCAGAATTCGAACATGCAGTCGATT 3΄

Για την απομόνωση του γονιδίου , έχουμε στην διάθεσή μας δύο περιοριστικές ενδονουκλεάσες , την

EcoRI και την TaqI  που αναγνωρίζει την αλληλουχία : 5΄ TCGA  3΄                                                                                                                   3΄ AGCT  5΄

       και κόβει μεταξύ Τ και C .

Να απαντήσετε στις παρακάτω ερωτήσεις και να τις αιτιολογήσετε .

α) Ποια από τις δύο περιοριστικές ενδονουκλεάσες θα χρησιμοποιηθεί και πόσα θραύσματα θα δημιουργηθούν από το κόψιμο του τμήματος αυτού;

β) Να γράψετε το θραύσμα που περιέχει το γονίδιο που θέλουμε να κλωνοποιηθεί .

γ) Να σχεδιάσετε το ανασυνδιασμένο πλασμίδιο και στο σχήμα να φαίνεται το θραύσμα με το γονίδιο και τα σημεία ένωσής του με το κομμένο πλασμίδιο .

δ) Να γράψετε το μεταφραζόμενο τμήμα του γονιδίου , με τον προσανατολισμό του .

ε) Να βρείτε , με τη χρήση του γενετικού κώδικα , το πεπτίδιο που παράγεται .